WEB-проект . Алгоритми опису мікропрепаратів

30.08.2015

Алгоритми опису мікропрепаратів

Для більшої частини початківців судово-медичних експертів гістологічних відділень значне утруднення викликає опис мікропрепаратів, виявлених у них патологічних змін. Для полегшення цього процесу, допомоги в морфологічній діагностиці створені запропоновані Вашій увазі алгоритми описів мікропрепаратів внутрішніх органів з прикладами опису ряду з них, приведенням практичної мікрофотографії.

Представлені алгоритми, фототаблиці та приклади опису мікропрепаратів головного мозку, серця, легень, печінки, нирок, селезінки, підшлункової залози, щитовидної залози, надниркових залоз, клітинної реакції в м’яких тканинах на пошкодження, альгологического дослідження (планктон).

Авторський колектив буде вдячний за Ваші пропозиції, спільне розгляд спірних питань. Пригашаем до співпраці.

У спеціальній літературі наводяться нечисленні схеми і алгоритми опису мікропрепаратів. Наведемо окремі з них.

А.Ст. Пермяков, В. І. Вітер, В. Ю. Толстолуцький. Основи судово-медичної гістології: Навчальний посібник. — Іжевськ, 1994. — С. 9.

СХЕМА ОПИСУ МІКРОПРЕПАРАТІВ

1. Під малим збільшенням мікроскопа робиться загальний огляд препарату. визначається орган або тканина, зазначається, збережена чи їх структура або вона порушена, описується стан капсули органу, паренхіми, строми. Потім звертається увага на стан судин (їх стінки, просвіт, наповнення кров’ю, просочування стінки плазмою, міграція формених елементів крові, їх крайове стояння), периваскулярну тканина, наявність набряку, запальної реакції і т. д. В ряді випадків доцільно окремо описувати стан артерій, вен, капілярів.

2. Для опису під великим збільшенням вибираються найбільш змінені ділянки тканин. Опис їх провадиться в тому ж порядку, що і опис під малим збільшенням. Опис їх провадиться в тому ж порядку, що і опис під малим збільшенням. Загострюється увага на наявність (відсутність) зміненої капсули органу. стан судин в ній. Детально описуються клітини паренхіми. стан оболонки і цитоплазми клітин, їх ядер, відношення до барвників, наявність включень у клітинах, їх взаємозв’язок, правильність утворення клітинами паренхіми в тих чи інших структурах.

При описістроми звертається увага на характер волокнистих структур, клітинний склад сполучної тканини, наявність (відсутність) набряку, крововиливів, запалення, включень (в тому числі і сторонніх). Описуються під великим збільшенням судини (роздільно артерії, вени, капіляри), зазначається стан всієї стінки та окремих її шарів, характер вмісту просвіту судини.

При описі полого органу або шкіри як під малим, так і підлогу великим збільшенням, дається пошарова характеристика органу. Опис залізистих структур починається з характеристики клітинних елементів, що входять до складу залози. Описується просвіт залозистих структур. Окремо описуються вивідні протоки, як дрібні, так і великі, потім вміст їх просвітів, стан судин.

Не слід в описовій частині користуватися термінами, що характеризують діагноз.

3. За результатами описовій частині підводиться підсумок у вигляді висновків, укладення або діагнозу.

Богомолов Д. В. Богомолова І. Н. «Алгоритм судово-гістологічного дослідження» / Методичні рекомендації. — Москва, 2010. — 14с.
ФГУ «РЦСМЭ Мінздоровсоцрозвитку Росії».

Методичні рекомендації призначені для судово-медичних експертів відділів експертизи трупів і гістологічних відділень Бюро судово-медичної експертизи.

Автори сайту дозволили собі окремі моменти методичних рекомендацій проілюструвати микрофотографией.

Алгоритм судово-гістологічного дослідження, призначений для судово-медичних експертів, дозволяє об’єктивізувати і значно прискорити процес судово-гістологічного дослідження, що необхідно для якісного і повноцінного вирішення питань, поставлених перед судово-слідчими органами перед судово-медичними експертами.

Даний алгоритм дозволяє уніфікувати процес вилучення біологічних матеріалів для судово-гістологічного дослідження, приготування гістологічних препаратів їх аналізу, значно прискорити виконання судово-гістологічних досліджень і забезпечити максимальну об’єктивність результатів, досяжну на сучасному рівні науки.

Даний алгоритм вперше забезпечує впровадження в експертну практику принципів доказової медицини та стандартизацію судово-гістологічних досліджень, що є основною умовою для зіставлення даних, отриманих різними експертами, оцінки цих даних експертами-танатологами, членами експертних комісій та представниками судово-слідчих органів. а також для перевірки якості роботи судово-медичних гистологов.

Застосування алгоритму разом з сучасним програмно-апаратним комплексом дозволить документувати результати досліджень для потреб слідчих органів, навчально-методичної та науково-дослідної роботи, проводити обмін інформацією між судово-медичними установами з метою перевірок і консультування, знизити вплив токсичних речовин, використовуваних для виготовлення гістологічних препаратів, на здоров’я працівників, забезпечити економію витратних матеріалів.

Алгоритм рекомендований до застосування при первинному судово-медичному дослідженні трупа з необхідністю судово-гістологічного дослідження матеріалу (для уточнення характеру і давності патологічного процесу, прижизненности і давності пошкоджень, характеристики травмуючого фактора, варіанти танатогенеза, темпу вмирання та ін).

Також можливе використання алгоритму при виробництві і додаткових комісійних судово-медичних експертиз, що включають первинні та повторні дослідження гістологічних матеріалів.

МАТЕРІАЛЬНО-ТЕХНІЧНЕ ЗАБЕЗПЕЧЕННЯ

СУДОВО-ГІСТОЛОГІЧНОГО ДОСЛІДЖЕННЯ

(РЦ СМЕ апробовано і використовується обладнання фірми Leica)

1. Контейнери для фіксації біопсійного та аутопсийного (біологічного) матеріалу.

2. Тканинний процесор карусельного типу Leica TP 1020. Легкий в управлінні, обов’язкова вимога — наявність окремого приміщення і витяжки (можливий програмований нічний режим роботи — відстрочений старт). Тканинний процесор замкнутого типу Leica ASP 300 (200) має істотна перевага порівняно з карусельної станцією — більш висока якість проводки, не пред’являє додаткових вимог (витяжки) для приміщень; разом з тим має особливість — більш високі вимоги до якості реактивів (у першу чергу, чистота парафіну).

3. Система заливки парафінів Leica EG 1160.

4. Санний Leica SM 2000R або ротаційний Leica RM 2235 мікротом з тримачем для ондноразовых і багаторазових ножів в комплекті з водяними банями.

5. Мікротом — кріостат Leica CM 1510.

6. Апарат для автоматичного фарбування гістологічних зрізів Leica Autostainer XL (в комплекті з гарячою осередком).

7. Мікроскоп минаючого світла (світле поле, темне поле, фазовий контраст, поляризація, флуресценция). Окуляр 10х, об’єктив 5х, 10х, 20х, 40х, 100х (масляна імерсія). Система освітлення мікроскопа на базі галогенової лампи-100Вт. Мікроскоп повинен бути оснащений цифровою камерою високого дозволу і програмним забезпеченням для кількісного аналізу зображень. У зв’язку з високою насиченістю мікроскопа методами дослідження, доцільний мікроскоп з можливістю автоматизованого перемикання методів Leica DM 4000 або з механічним перемиканням Leica DM 2500. Цим вимогам відповідають обладнання фірм Nicon, Olympus, Микром та ін

Власне алгоритм включає в себе ряд етапів, послідовне виконання яких гарантує якість результату.

У процесі вилучення матеріалу для судово-гістологічного дослідження, крім діючих нормативних документів, слід керуватися наступними рекомендаціями.

ВІДБІР І ФІКСАЦІЯ МАТЕРІАЛУ

З тканин і органів трупа вилучають фрагменти розмірами: товщиною до 1см, площею не менше 1,5х1,5см. Для якісної фіксації досить обмеження розмірів в одному вимірі. Інформативність дослідження при малій кількості матеріалу знижується. Стінки порожнистих органів, площинних утворень, шкіри поміщають в розчин фіксатора на картонній положке. Дрібні та марковані об’єкти поміщають в марлю або спеціальні контейнери.

Фіксація матеріалу здійснюється шляхом занурення шматочків органів і тканин нейтральний розчин 10% формаліну при кімнатній температурі. Обсяг фіксатора не менш ніж в 20 разів повинен перевищувати обсяг досліджуваних тканин. На поверхню фіксуються шматочків кладуть марлеву або тканинну серветки, щоб уникнути висихання спливаючих шматочків легенів.

При необхідності термінового дослідження проводять прискорену фіксацію в термостаті +60°С протягом 1 години, після чого можна робити вирізку, в процесі якої матеріал кладуть у підігрітий формалін. Якщо вирізку вирішено відкласти, матеріал зберігають у 10% нейтральному формаліні поза термостата скільки завгодно довгий час. При наявності аутолізу прискорену фіксацію проводять в термостаті при темературе +37°С, тривалість експозиції- 1,5 — 2 години (в залежності від характеру тканини або органу).

Частинки висохлих тканин і шматочки від муміфікованих трупів, трупів в стані торф’яного дублення або жировоска направляються на судово-гістологічне дослідження у нефіксованому вигляді.

При заборі матеріалу від трупів у всіх випадках необхідно вилучати шматочки головного мозку, серця, легені, печінки і нирки. Вилучення іншого матеріалу проводять в залежності від мети дослідження.

При наявності макроскопічно видимих ушкоджень та змін, шматочки вилучають за їх межі.

Вилучення шматочків органів і тканин з підозрою на крововиливу здійснюють виключно при необхідності уточнення характеру, визначення давності і прижизненности процесу.

При вилученні більше 1 шматочка м’яких тканин або необхідності виявлення змін у певних ділянках внутрішніх органів, виробляють з маркування — на етикетці шляхом зазначення порядкового номера, що наноситься графітовим олівцем на матеріалі, стійкий до дії фіксатора. який разом з шматочком поміщають в марлеву серветку.

відсутності макроскопічно видимих пошкоджень і патологічних змін внутрішніх органів роблять відбір таких шматочків:

— головного мозку (кори передньоцентральній звивини, підкіркових ядер з області блідої кулі, поперечний зріз довгастого мозку вище олив);

— міокарда (лівого шлуночка і міжшлуночкової перегородки (МЖП)),

— легенів (з нижньої частки і прикореневого відділу поза зоною гипостаза),

— правої частки печінки (на віддалі від воріт і капсули),

— нирки (містить кору, піраміди і стінку чашечки),

— надниркових залоз (з захопленням усіх шарів),

— фрагмента щитовидної залози.

Важливо враховувати передбачуваний вид смерті при вилученні матеріалу. Наприклад, при странгуляційній асфіксії необхідно вилучати фрагмент странгуляційної борозни на всю глибину тканини аж до м’язової тканини з захопленням прилеглих малозмінених тканин. У випадках раптової смерті крім змінених ділянок міокарда і фрагментів вінцевих артерій необхідно вилучати фрагменти правого і лівого шлуночка, МЖП. При ЧМТ потрібно забирати фрагменти уражених м’яких тканин, мозкових оболонок і тканини мозку єдиним блоком, при цьому не забуваючи взяти фрагмент прикордонної з пошкодженням та інтактної для складання адекватного судження про природу ураження.

Подібним чином потрібно вилучати матеріал при інших пошкодженнях, не забуваючи про необхідність вилучення прикордонної та інтактної зон по відношенню до зони патологічних змін.

У напрямку матеріалу на судово-гістологічне дослідження вказують: перелік вилучених об’єктів, найменування шматочків, кількість шматочків (загальне та з органів), спосіб фіксації, мета судово-гістологічного дослідження, макроскопічні дані, попереднього судово-медичного діагнозу.

Остаточна вирізка матеріалу для гістологічного дослідження щоб уникнути конфліктних ситуацій виконується лікарем — судово-медичним експертом. проводила дослідження трупа.

При наявності пошкоджень і патологічних змін у зрізі має бути також візуально незмінена тканина.

У зрізах повинні бути присутніми всі структури досліджуваного органу (в зрізах порожнистих органів і порожнинних утворень повинні бути всі верстви їх стінок, в зрізах шкіри — всі її шари і підшкірна основа).

В препаратах міокарда повинні переважати поздовжні зрізи м’язових волокон.

ВИГОТОВЛЕННЯ ГІСТОЛОГІЧНИХ ПРЕПАРАТІВ

Виготовлення зрізів здійснюється шляхом різання блоків, залитих в парафінові середовища. Виготовлення зрізів методом заморожування проводиться виключно при необхідності проведення фарбувань, використовуються тільки на заморожених зрізах. Целлоидиновый метод заливки є кращим тільки при дослідженні кісткової тканини міокарда.

Сучасні методики проведення дозволяють отримувати препарати вже через кілька годин після завершення фіксації матеріалу.

Наприклад, прискорену спирто — хлороформную проводку проводять за наступною схемою:

Всі компоненти батареї для проводки повинні знаходитися в термостаті при +60°C

  1. Вирізаний матеріал, що знаходиться в розчині формаліну, без промивки поміщають в 1-й спирт 50° і витримують в термостаті 20 хв.
  2. Матеріал переносять в 2-й спирт 70° і витримують в термостаті 20хв.
  3. Матеріал переносять у 3-й спирт 80° і витримують в термостаті 20хв.
  4. Матеріал ретельно промокають і переносять у 4-й спирт 96° і витримують в термостаті 20хв.
  5. Матеріал переносять в суміш спирт 96° — хлороформ у співвідношенні 1:1 і витримують в термостаті 20хв.
  6. Віджавши шматочки, матеріал переносять в хлороформ і витримують в термостаті 20хв.
  7. Матеріал переносять у «парафінову кашу» (суміш парафіну з хлороформом) і витримують в термостаті 20хв.
  8. Матеріал переносять в парафін 1 і витримують в термостаті 20хв.
  9. Матеріал переносять в парафін 2 і витримують в термостаті 20хв.
  10. Матеріал переносять в парафін 3 і витримують в термостаті 20хв.
  11. Заливка в блоки, після чого препарати виготовляють звичайним способом.

Експрес проводка вимагає точного дотримання строку перенесення зразків з одного розчину в інший. Для його забезпечення доцільно використовувати автоматичний процесор обробки (проводки) тканин для гістології. Перевагою сучасних апаратів є також системи контролю шкідливих випарів.

Товщина парафінових зрізів не повинна перевищувати 5-7 мк, що вимагає використання сучасних мікротомів.

Автори сайту продемонструють чітку картину в тонких зрізах; стертість, розмитість картини в товстих зрізах, що значно впливає на якість мікрофотографії.

Короткий опис статті: гістологія шкіри

Джерело: WEB-проект | Алгоритми опису мікропрепаратів

Також ви можете прочитати