Вимоги, що предявляються до гістологічного препарату . Робота з мікроскопом .

26.07.2015

Вимоги, що пред’являються до гістологічного препарату

  1. Структура препарату повинна відповідати прижиттєвого будовою органу і тканини.
  2. Препарат повинен бути тонким і прозорим.
  3. Препарат повинен бути забарвленим.
  4. Препарат повинен довго зберігатися (це досягається укладанням в бальзам).

Основні етапи приготування гістологічного препарату для светооптического дослідження:

I. Взяття матеріалу

Вимоги, що пред’являються до взяття матеріалу:

1. Матеріал повинен бути свіжим.

2. Висічення шматочків виробляємо скальпелем або лезом.

3. Не можна промивати водою або протирати ганчіркою.

4. Брати матеріал слід з мінімальною затратою часу.

5. Обсяг шматочка повинен бути не більше 0,5-1 см3.

6. Взяття матеріалу повинно проводитися згідно будовою органу.

7. Якщо ми маємо справу з пухлинним ділянкою, то матеріал повинен братися на кордоні хворого і здорового ділянок.

II. Фіксація — метод обробки живого об’єкта фіксуючими речовинами з метою збереження прижиттєвої структури органу або тканини.

Механізм фіксації заснований на коагуляції білків.

Види фіксаторів:

А) Фізичні:

1.холод (заморожування)

2.лиофильная сушіння (сушка на морозі)

Б) Хімічні:

1. Прості — складаються з одного інгредієнта:

— 10% формалін

— сульфосалициловая кислота

2. Складні:

— суміш Буена (пикриновая кислота, формалін, оцтова кислота)

— суміші Карнуа (спирт, формалін, оцтова кислота)

— суміш Ценкера (біхромат калію, сірчистий натрій, сулема, оцтова кислота)

Правила фіксації:

1. Обсяг фіксатора в 20-40 разів повинен перевищувати обсяг фіксованого об’єкта.

2. Час фіксації визначається обсягом шматочки і вибором фіксатора.

3. Вибір фіксатора залежить від цілей і завдань дослідника.

III. Промивка у воді — для водорозчинних фіксаторів і в спирті — для спирторозчинних фіксаторів.

Мета: звільнення від фіксатора.

IV. Зневоднення і ущільнення — проводять у батареї спиртів зростаючої концентрації (фортеці).

Основне правило: правило поступового впливу застосовуваних речовин на досліджувані тканини.

Якщо застосовували водорозчинний фіксатор, тоді батарея спиртів наступна:

300-400-500-600-700-800-900-960 I-960 II-1000 абсолютний спирт

Якщо застосовували спірторастворімий фіксатор, батарея спиртів починається з 700 спирту: 700-800-900-960I-960 II-1000 абсолютний спирт

V. Заливка — просочування речовинами представляють собою щільні середовища. Заливку виробляють в парафін і в целлоидин.

А) Парафінова заливка

Парафін не розчиняється в спирті, зате розчиняється у органічних розчинниках (бензол, ксилол, толуол, хлороформ). Перш ніж матеріал залити в парафін, його потрібно провести через ряд проміжних середовищ:

спирт + ксилол — ксилол I — ксилол II — ксилол + парафін (t = 370) — парафін I (t = 560) — парафін II(t = 560) — заливний парафін (містить 5% воску)

Позитивні сторони парафінової заливки:

1) Можна робити тонкі зрізи &?; 5 мкм

2) Відносна швидкість проводки: час перебування в різних середовищах залежить від структури органу та розміру шматочки і підбирається досвідченим шляхом.

Негативні сторони парафінової заливки:

1) Вплив на об’єкт високих температур, що часто призводить до висушування і деформації матеріалу.

2) Можливість заливати тільки дрібні об’єкти

Б) Целлоидиновая заливка

Целлоидин — це нитроклетчатка, для цієї мети використовують рентгенівські плівки, які розчиняються в суміші спирт + ефір. Виходить рідкий целлоидин. Проводку здійснюється в послідовності:

Спирт + ефір — 2% целлоидин — 4% целлоидин — 6% целлоидин — 8-10% целлоидин. Далі поміщають заливається об’єкт у чашку Петрі з 10% целлоидином і відкривають кришку, щоб середовище вийшла еластичною. Потім вирізують об’єкт разом із середовищем і приклеюють за допомогою густого целлоидина до дерев’яного блоку. Такий гістологічний блок зберігають в банку з 70-градусним спиртом, щоб запобігти від висихання. Парафінові блоки можна зберігати при кімнатній температурі.

Позитивні сторони парафінової заливки:

1) можна заливати більш великі об’єкти

Негативні сторони парафінової заливки:

1) неможливість отримати тонкі зрізи, товщина зрізів =20 мкм

VI. Різання

Різання здійснюють на приладі під назвою мікротом.

Основний елемент микротома — сталевий ніж.

Мікротом може знаходитися всередині приладу, який підтримує постійну t &?; — 18-200. Він носить назву кріостат. Цей прилад широко використовується для експрес-діагностики під час хірургічних операцій, для наукових досліджень, для гістохімічних методів дослідження, так як етапи фіксації і ущільнення здійснюються одночасно завдяки заморожування при низьких температурах і істотно економлять час дослідження.

Після різання парафіновий зріз поміщають в краплю води на предметне скло і злегка підігрівають на термостолике, щоб зріз розправився. Далі залишають скло до повного висихання води.

VII. Депарафинизация.

Перш ніж фарбувати гістологічний зріз, необхідно звільнитися від парафіну і наповнити препарат, так як звичайні гістологічні барвники водні. Препарат на предметному склі занурюють у наступні розчини:

ксилол I — ксилол II — 960 I — 960 II — 700 — Н2О

VIII. Фарбування

Препарат фарбують спочатку ядерних барвником, потім цитоплазматичних.

Види барвників:

А) ядерні (основні)

· гематоксилін (забарвлює ядро в синій колір)

· залізний гематоксилін

· азур II (фіолетовий колір)

· кармін (червоний колір)

· сафранін (червоний колір)

· метиловий синій (синій колір)

· помаранчевий «G»

· кислий фуксин — в червоний

· пикриновая кислота — в жовтий

· конго червоний — червоний

В) спеціальні

· судан III — забарвлення ліпідів і жирів в помаранчевий колір

· осмиевая кислота — забарвлення ліпідів і жирів в чорний колір

· орсеин — забарвлення еластичних волокон в коричневий колір

· азотнокисле срібло — імпрегнація нервових елементів в темно-коричневий колір

Структури клітини, що фарбуються кислими барвниками називаються оксифильными (ацидофільними ) — фарбування в рожевий колір.

Структури клітини, що фарбуються основними барвниками називаються базофильными — забарвлення в синій колір.

Структури клітини, що фарбуються, як основними, так і кислими барвниками одночасно називаються нейтрофильными — фарбування в фіолетовий колір.

IX. Просвітлення здійснюють в таких розчинах:

Н2О — 700 — 960 I- 960 II- ксилолІ — ксилол I

X. Висновок у бальзам.

Використовують канадський бальзам, так як його коефіцієнт заломлення дорівнює коефіцієнту заломлення скла. Після нанесення бальзаму зріз покривають покривним склом. Після висушування гістологічний препарат готовий для проведення гістологічного аналізу.

Вимоги, що предявляються до гістологічного препарату . Робота з мікроскопом .

Малюнок 1. Приготування гістологічних препаратів для світлової мікроскопії.

Короткий опис статті: гістологію Структура препарату повинна відповідати прижиттєвого будовою органу і тканини. Препарат повинен бути тонким і прозорим. Препарат повинен бути забарвленим. Препарат повинен довго зберігатися (е… Біологія, біологія онлайн, підручник біології, радіологія, мікробіологія, ДНК, бактерії, мікроби, психологія, валеологія, ОБЖД, психологія, медицина.

Джерело: Вимоги, що пред’являються до гістологічного препарату | Робота з мікроскопом | Мікробіологія

Також ви можете прочитати