Види біопсій і порядок надходження біопсійного матеріалу на гістологічне

18.08.2015

Види біопсій і порядок надходження біопсійного матеріалу на гістологічне дослідження

.

ВИДИ БІОПСІЙ І ПОРЯДОК НАДХОДЖЕННЯ БІОПСІЙНОГО МАТЕРІАЛУ НА ГІСТОЛОГІЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ

У клініці використовують кілька способів взяття біопсійного матеріалу: відкритий, пункційний, аспіраційний, ендоскопічний, трепанобіопсія. Крім того, важливе значення має цитологічний метод (мазки відбитки тощо), пов’язаний з мінімальною травмою при взяття матеріалу і можливістю проведення дослідження в екстреному порядку. Гістологічні та цитологічні методи взаємно доповнюють один одного.

Існує усталений порядок надходження біопсійного матеріалу в патогістологічну лабораторію.

1. Матеріал, призначений для гістологічного дослідження, повинен мати чітке маркування і супроводжуватися напрямком. Матеріал від одного хворого повинен бути поміщений в окрему посуд. Етикетку з щільної, неразмокающей у воді паперу (краще фотопаперу) прикріплюють до об’єкта. Написи роблять тільки м’яким простим олівцем.

2. Фіксацію виробляють в передопераційній, куди заздалегідь доставляють в достатній кількості 10 % нейтральний формалін.

3. Стандартний бланк направлення на патогістологічне дослідження заповнює і підписує лікар. При цьому в напрямку відображають такі клінічні дані, як тривалість захворювання, характер проведеного лікування, результати попередніх досліджень, якщо вони проводилися. При наявності пухлини необхідно вказати точну локалізацію, темпи зростання, розміри, консистенцію, відношення до оточуючих тканин, наявність метастазів та інших пухлинних вузлів, спеціальне лікування та клінічний діагноз. Якщо в напрямку відсутні необхідні дані, завідуючий патологоанатомічним відділенням ставить про це до відома завідувача відділення, звідки було надіслано біопсія, а при повторних випадках повідомляє адміністрації.

5. При прийомі матеріалу в напрям і журнал надходжень вписують порядковий номер патогістологічного дослідження кожного об’єкта і час надходження матеріалу, а також вказують характер біопсії — діагностична, термінова, операційний матеріал, кількість шматочків, методики забарвлення.

6. Матеріал діагностичної біопсії забороняється ділити на частини і посилати їх в різні патогістологічні лабораторії, те ж саме відноситься і до матеріалу для цитологічного дослідження.

7. Відповідальність за якість доставленого в лабораторію матеріалу несе лікар, який призначив таке дослідження. Підсохлий, загнив, заморожений, нефіксований матеріал не приймають в патогістологічне відділення і про такі факти повідомляють адміністрації лікувального закладу.

8. Якщо за умовами роботи неможливо відразу відправити з операційної матеріал в патогістологічну лабораторію, то хірург, який проводив операцію, забезпечує правильну фіксацію матеріалу і його збереження.

Після реєстрації наданого на дослідження об’єкта вирізають необхідну кількість шматочків. Матеріал, отриманий методом зіскрібка, в тому числі при гінекологічному дослідженні, аспіраційних та інших біопсіях, а також трепанобиопсии, досліджують цілком.

Удосконалення методів діагностики та розвиток гістологічної техніки спрямовані на зменшення тривалості приготування якісних препаратів з метою забезпечення швидкого і точного встановлення діагнозу. Якщо раніше результати мікроскопічного дослідження і відповідь на біопсію можна було отримати через 4-5 діб від моменту надходження матеріалу, то тепер тривалість дослідження зменшилася до 1 діб, а при чітко організованій роботі і наявності сучасного обладнання весь процес можна завершити за кілька годин.

Висновок підписують патологоанатом і лаборант. Всі висновки, засновані на даних термінових біопсій, найчастіше носять попередній характер, тому повинні бути підтверджені після заливки залишився операційного матеріалу з виготовленням достатньої кількості зрізів, за результатами дослідження яких дають остаточний висновок.

ОСОБЛИВОСТІ ОБРОБКИ МАТЕРІАЛУ БІОПСІЙ РІЗНИХ ОРГАНІВ

Основні прийоми взяття зразків тканини, з допомогою яких можна отримати максимум інформації про структуру органу та її зміни, викладені в керівництві з гістологічної техніки і в монографіях, присвячених патології різних органів і тканин, а також в деяких розділах цього посібника. У зв’язку з цим доцільно зупинитися лише на деяких основних особливості взяття найбільш часто досліджуваного матеріалу і його обробки з застосуванням прискорених методик.

Перш за все слід згадати про правильному висічення шматочків з органів, що виробляють гострими інструментами: скальпелем, лезом бритви, малими очними ножицями і ін Неприпустимі деформація і механічне пошкодження тканини, тому шматочки губчастої кістки не слід відкушувати кусачками, а рекомендується використовувати пиляльні інструменти. Якщо тканина компактна і структури розподілені в органі відносно рівномірно, то шматочок вирізують з будь-якого відділу разом з капсулою (печінка, селезінка, підшлункова залоза та ін). Шматочки з нирок і надниркових залоз вирізають так, щоб на зрізі було і кіркова і мозкова речовина. Порожнисті органи досліджують на поперечних перерізах, що проходять через всі шари стінки. Якщо при макроскопічному дослідженні тканини виявлені патологічні зміни (пухлини, ерозії, інфільтрати), то шматочки обов’язково січуть на кордоні з нормальним ділянкою тканини. Особливо важливе місце переходу нормальної тканини в пухлинну.

У тому випадку, якщо для дослідження присланий досить великий об’єкт, його слід розрізати на пластини товщиною до 5 мм і вивчати з допомогою бінокулярної лупи або стереомікроскопа для орієнтовної диференціації дисгормональних, диспластичних процесів в залізистих органах (збереження дольчатости, наявність вузлів, однорідності, дрібнозернистої структури) і пухлин (фокуси ущільнення, «скловидні» поля, сосочкові структури, псаммомные тельця, вогнища некрозу, звапнення). Крім того, завдяки цим дослідженням можна правильно зорієнтувати дрібні шматочки біоптатів на блоці.

Вирізані шматочки тканини повинні мати розмір не більш 1,5х1х0,5 см, оптимальний для швидкої фіксації і проводки матеріалу. У разі необхідності свіжий матеріал можна промити в ізотонічному розчині хлориду натрію, а потім фіксувати. Промивання у воді нефіксованого матеріалу неприпустимо.

При ендоскопічних і пункційних біопсіях шлунка або прямої кишки, коли кількість матеріалу обмежений, слід розрізати циліндричний шматочок на 2 частини так, щоб на зрізі була слизова оболонка і підслизова основа. При біопсії нирки шматочок треба орієнтувати так, щоб на зрізі було кіркова і мозкова речовина. Одну частину пунктату заливають у парафін для гістологічних і гістохімічних досліджень, іншу використовують для електронно-мікроскопічного дослідження і/або флуоресцентної мікроскопії.

Шкіра. Кращим фіксатором для біоптатів шкіри є рідину Карнуа [Левер Ф. У. 1958; Мордовцев Ст. Н. Цвєткова Р. Н. 1993]. Тривалість фіксації 2 год при 4 °С. Для того щоб уникнути пересушування, в якості проміжної середовища краще використовувати хлороформ. Поздовжні шматочки шкіри заливають в бічному положенні, щоб зріз проходив через всі шари епідермісу і дерми. При отриманні зрізів із парафінових блоків часто застосовують охолодження об’єкта кубиком льоду. Крім забарвлення гематоксилином та еозином, шкіру обов’язково фарбують Ван-Гизону, импрегнируют за Гоморі та виявляють кислі глікозаміноглікани толуїдиновим синім, тобто досліджують за допомогою методик, які застосовуються при вивченні сполучної тканини. У разі наявності ділянки шкіри з пігментним новоутворенням вирізають від 2 до 6 шматочків тканини завтовшки 3-4 мм. На зрізі має бути і незмінений ділянку шкіри. При вивченні пігментного невуса зазвичай застосовують реакцію Перлса, ДОПА-реакцію і метод Фонтану— Массона.

Молочна залоза. Можливі три типи зразків тканин молочної залози: 1) шматочки, отримані при діагностичних біопсіях; 2) ділянки тканини після секторальної резекції з віддаленими пахвовими лімфатичними вузлами або без них; 3) заліза після радикальної мастектомії. Після ретельної пальпації надісланого матеріалу виявляють більш щільні ділянки, які січуть і нумерують. Частина залози після секторальної резекції або орган після радикальної мастектомії розсікають у площині ходу проток, патологічно — змінених ділянки вирізають і фіксують у 10 % нейтральному формаліні.

Органи шлунково-кишкового тракту. При вивченні патології травної системи слід враховувати гістологічну будову досліджуваного відділу і відповідно до цього правильно орієнтувати матеріал. Наприклад, слинні залози розташовують так, щоб зріз потрапили вивідні протоки. При вивченні стравоходу поздовжньо посічені смужки тканини повинні включати макроскопічно немодифіковану слизову оболонку і край новоутворення або виразки.

Ендоскопічні гастробиоптаты часто мають невеликі розміри, тому їх проводять 2-3-шаровим марлевому мішечку і заливають в один блок. Л. В. Аруін і співавт. (1993) рекомендують приклеювати біоптати на смужку печінкової тканини або поміщати їх у невеликий розріз шматочки печінки з подальшим сходженням краю розрізу. Розміщення шматочків слизової оболонки, отриманих від одного хворого з різних її ділянок або від різних хворих, печінки дозволяє проводити достовірне зіставлення різних об’єктів і при мікроскопірованіі ідентифікувати шматочки, що належать до різних відділів.

Операційний матеріал може бути представлений иссеченным новоутворенням, віддаленим шлунком або його частиною разом з пухлиною. Макроскопічне дослідження шлунка Ст. А. Самсонов (1989) рекомендує проводити до фіксації, при якій відбувається деформація органу. Після поздовжнього розтину шлунка поза пухлини вимірюють розміри його по малій та великій кривизні, потім розсікають всю стінку шлунка через пухлину. При виразковому дефекті вирізають або поздовжню пластинку тканини через весь дефект, або виробляють хрестоподібне висічення матеріалу, що дозволяє досліджувати краю виразки з чотирьох сторін. При наявності полипозного освіти зріз проводять через ніжку поліпа. Якщо є кілька поліпів, то необхідно брати матеріал з кожного. Існує певний набір методик, рекомендованих для вивчення матеріалу біопсій шлунка: забарвлення гематоксилином та еозином, пикрофуксином за Ван-Гизону, карміном, альциановым синім, застосовують також ШИК-реакцію. Особливо інформативна методика, що поєднує ШИК-реакцію з обробкою зрізів реактивом Романовського—Гимзы.

При дослідженні резецированной товстої кишки матеріал вирізають через ніжку поліпа або середину виразки, щоб ці зміни потрапили на зріз.

Червоподібний відросток розкривають гострим ножем по довжині або роблять поперечні зрізи. Якщо макроскопічно зміни відростка розподілені нерівномірно, то вирізають ділянки з найбільшими і найменшими змінами [Калитеевский П. Ст. 1993], приділяючи особливу увагу перфорациям і дивертикулам. Звільнивши відросток від вмісту, описують виявлені при цьому сторонні тіла, паразити та ін. потім оглядають його слизову оболонку. При апендициті вона набрякла, повнокровна часто з крововиливами і неглибокими виразками.

Вирізані і фіксовані в 10 % нейтральному формаліні шматочки відростка ріжуть на замораживающем мікротоми або заливають у парафін, фарбують зазвичай тільки гематоксилином та еозином.

Жовчний міхур необхідно фіксувати відразу ж після його видалення. Орган розрізають уздовж, видаляють жовч і розтягують міхур на картоні слизовою оболонкою вгору. Іноді жовч з порожнини міхура витягують шприцом, а потім заповнюють його фіксуючою рідиною. При наявності на внутрішній поверхні виразкових дефектів або пухлинних розростань необхідно їх описати, виміряти, відзначаючи локалізацію і ставлення до різних шарів стінки міхура. Вирізають шматочки з ділянок з найбільшими і найменшими змінами органу. За даними Р. Р. Автандилова (1994), якість зрізів підвищується при заливці шматочків тканини жовчного міхура в целлоидин-парафін.

Підшлункову залозу рекомендують фіксувати відразу ж після видалення, так як тканина органу швидко піддається аутолизу. Розрізи роблять по ходу проток. Крім рутинних методів забарвлення, використовують фарбування препаратів за Маллорі, Гоморі, альдегід-фуксином.

Біоптати печінки фіксують у 10 % забуференному формаліні, а якщо передбачається виявлення глікогену, то використовують фіксатор Карнуа. При цьому тривалість фіксації дрібних біоптатів повинна бути не більше 30 хв, що не завжди можливо. Після заливки в парафін з кожного блоку готують 25— 30 зрізів і поміщають їх на 4-5 предметних стекол. Використовують забарвлення гематоксилином та еозином, за Ван-Гизону, іноді импрегнацию за Гоморі та виявлення заліза за Перлсом. Крім того, при дослідженні матеріалу біопсій печінки дуже важливо виявлення поверхневого антигену гепатиту В за методом, запропонованим Т. Shikata і співавт. (1973).

1. Після депарафинирования зрізи поміщають на 10 хв в суміш 5 % перманганату калію

(9,5 мл), 3 % сірчаної кислоти (5 мл), дистильованої води до 100 мл

2. Знебарвлюють протягом 10 хв у 2 % щавлевої кислоти.

3. Промивають в проточній воді.

4. Фарбують 4 год при 22 °С в суміші, що складається з 1 г орсеина, 100 мл 70 % спирту і 2 мл концентрованої соляної кислоти (рН 1,0—2,0).

5. Диференціюють 1 % соляній кислоті на 70 % спирті 5 хв. Промивають у проточній воді, зневоднюють, укладають у бальзам.

Результат: HBs-антиген, еластичні волокна і білкові комплекси забарвлюються в коричневий колір 1 .

Органи дихання. Гістологічному дослідженню піддають найчастіше шматочки з порожнини носа, синусів гортані, бронхів, легені. Шматочки з резецированной гортані січуть вертикальними розрізами, що проходять через пухлину і голосові складки. Біоптати, отримані при бронхоскопії, фіксують в нейтральному 10 % формаліні і компактно, в одному блоці, заливають у парафін. Найбільшою інформативністю для ендоскопічних бронхобиопсий має електронно-мікроскопічний метод дослідження в комбінації з вивченням полутонких зрізів [Непомнящих Р. В. 1978]. При вирізці тканини легені для гістологічного дослідження враховують сегментарне будова органу. Зріз повинен проходити поздовжньо через бронх і його гілки. З тканиною легень рекомендується працювати після хорошої фіксації матеріалу в 10 % нейтральному формаліні, так як робота з цим органом на замораживающем мікротоми і в криостате пов’язана з ризиком інфікування туберкульозом та іншими інфекціями. Плевру вивчають на зрізах, йдуть перпендикулярно до її поверхні. З гістологічних методів найчастіше застосовують забарвлення гематоксилином та еозином в поєднанні з попередньо проведеної реакцію Перлса на залізо і забарвлення пикрофуксином за Ван-Гизону в комбінації з резорцин-фуксином, забарвлюючим еластичний каркас легені; використовують також методи, що дозволяють виявити слиз і кератин.

Сечостатева система. Нирку після нефректомії чи її віддалену частину розрізають від зовнішньої поверхні поздовжньо в напрямку до воріт, потім січуть шматочки трикутної форми, що включають кіркова і мозкова речовина. Матеріал, отриманий в результаті пункційної біопсії нирки, фіксують у 10 % нейтральному формаліні і заливають у парафін. Зрізи товщиною 4-6 мкм фарбують гематоксилином та еозином, пикрофуксином за Ван-Гизону, азаном по Гейденгайну, конго червоним, проводять ШИК-реакцію. Для диференціальної діагностики використовують також імуногістохімічний метод Кунса з застосуванням моноспеціфіческіх сироваток.

При дослідженні резецированного сечового міхура вирізають шматочки зміненої тканини і прилеглі до неї незмінені ділянки. Матеріал фіксують у 10 % нейтральному формаліні і фарбують гематоксилином та еозином, за Ван-Гизону та резорцин-фуксином’.

Патологію сечоводу вивчають на поперечних зрізах, застосовуючи стандартний набір загальноприйнятих методів гістологічного дослідження.

Передміхурову залозу (після вирізки і фіксації) вивчають на горизонтальних зрізах органу, які фарбують гематоксилином та еозином і за Ван-Гизону. Эндоуретальные і игловые біоптати передміхурової залози обробляють так само, як і матеріал інших пункційних біопсій: проводять в мішечках з декількох шарів марлі по прискореному методу для дрібних об’єктів, заливають у парафін в один блок, ріжуть практично весь матеріал і зрізи поміщають на 5-6 предметних стекол, частина з яких фарбують трьома основними методами, інші зберігають в архіві.

Яєчко, яке надійшло на гістологічне дослідження, розсікають по довгому діаметру і вирізують до фіксації. У разі необхідності до фіксації проводять забір матеріалу для бактеріологічного дослідження. Фіксувати цей орган краще в рідині Карнуа, але можна використовувати і 10 % нейтральний формалін.

Статевий член і мошонку досліджують на поздовжніх розрізах, проведення, фіксація і методи фарбування звичайні.

При обробці матеріалу біопсій вульви зрізи повинні проходити перпендикулярно поверхні препарату в напрямку його довгої осі. Матеріал біопсії рекомендують фіксувати в 10 % нейтральному формаліні. Эндоцервикальные зіскрібки часто містять кров і слиз. Матеріал досліджують повністю після попереднього промивання в ізотонічному розчині хлориду натрію на фільтрувальному папері.

Для дослідження конічних біопсій шийки матки потрібна чітка просторова орієнтація осередку ураження. Для цього рекомендують прошити ділянку шийки матки у точці, що відповідає 12 години циферблата. Інтраепітеліальна пухлина шийки матки часто виявляється в зоні переходу плоского епітелію в залозистий. Матеріал конічної біопсії розсікають у зоні 3 годин циферблата, де пухлинний ріст найменш імовірний. Розкриту шийку прикріплюють шпильками до корковій основі і фіксують протягом 3 ч. Вирізку виробляють серійно і блоки поміщають в окремі касети.

Зіскрібки ендометрію (весь матеріал, включаючи невелику кількість згортків крові) поміщають в двошаровий марлевий мішечок, фіксують, промивають, зневоднюють і заливають у парафін. Загальна тривалість проведення 2-3 ч. Отримувати зрізи на замораживающем мікротоми не рекомендують. Препарати фарбують гематоксилином та еозином, за Ван-Гизону, муцикармином або альциановым синім.

Операційний матеріал, отриманий при тотальній і радикальної вульвэктомии, повинен бути расправлен, фіксований, а потім розсічений з інтервалом 0,5 див. Піхву слід розкривати подовжньо стороні, протилежній пухлини; беруть також шматочки з країв операційного розрізу і всіх лімфатичних вузлів, виявлених у віддалених м’яких тканинах. Порожнину матки розкривають перед фіксацією за допомогою Т-подібного розрізу, виробленого по передній стінці. Надалі розрізи виконують за правилами, прийнятим у прозекторській практиці. Не слід розчленовувати матеріал на шматки. Яєчники, видалені під час гістеректомії, зважують і вимірюють, а потім розрізають сагиттально в напрямку найбільшого діаметра з включенням до зріз області воріт. При наявності кіст вирізають ділянки потовщення стінки кісти. Гістологічні препарати забарвлюють гематоксилином та еозином і за Ван-Гизону.

Щитовидна залоза. Особливість обробки тканини щитовидної залози пов’язана з вираженим сморщиванием тиреоїдної тканини при фіксації і заливки в парафін, тому Н.Н. Гольдбурт (1993) рекомендує користуватися замороженими зрізами. Попередньо тканина вивчають за допомогою стереомікроскопа і з підозрілих ділянок вирізають шматочки, які поміщають на столик микротома у вигляді єдиного блоку так, щоб в отриманому зрізі була максимально представлена капсула вузла.

Наднирник. Його розсікають по довгій осі, хромафинної тканини досліджують повністю.

Трепанобиопсии. Матеріал надходить у вигляді трепанатов кісткового мозку і шматочків губчастої кістки. Після фіксації в 10 % нейтральному формаліні або ценкер-формоле і промивання у проточній воді матеріал декальцинируют в 50 % розчині мурашиної кислоти, розведеної 70 % спиртом; тривалість декальцинації від 12 до 24 год залежно від величини шматочків. Швидко хороші результати дає декальцинація в трилоне Б. Від кислоти матеріал відмивають у кількох працях 70 % спирту, потім зневоднюють і знежирюють в 2 змінах 96 % і 100 % спирту, заливають у парафін через хлороформ (1 — 2 год), хлороформ-парафін при 37 °С (1

2 год), парафін при 56° (1-2 год). Р. А. Меркулов (1969) рекомендує для цього матеріалу заливку целлоидин-парафін. Поряд з оглядовими фарбуваннями при вивченні матеріалу трепанобіопсій застосовують реакції на пероксидазу, ліпіди з суданом чорним, глікоген з допомогою Шик реакції, неспецифічну естеразу, кислу фосфатазу.

Селезінка і лімфатичні вузли. Селезінку розрізають по більшому діаметру, вирізують 3-4 шматочки і фіксують у 10 % нейтральному формаліні. Препарати фарбують гематоксилином та еозином і за Ван-Гизону. Особливу увагу потрібно при дослідженні лімфатичних вузлів, які є як органами імуногенезу, так і колекторами метастазів злоякісних пухлин. Їх міряють, зважують, а потім після розсічення по малому діаметру занурюють у фіксатор (10 % нейтральний формалін або рідину Карнуа).

схожі матеріали в каталогах
схожі статті

Гістохімічні дослідження мікросомальної етанолокислювальної системи при смертельних отруєннях алкоголем / Породенко Ст. А. Панкратова А. А. Травенко Е. Н. Бондаренко С. В. // Мат. VI Всеросс. з’їзду судових медиків. — М.-Тюмень, 2005. — №. — С. 229.

Використання люмінесцентного методу судово-медичної (гістологічної) практики / Хромова А. М. Валиуллина Д. М. // Проблеми експертизи в медицині. — 2001. — №1. — С. 33-34.

Короткий опис статті: гістологічне дослідження Види біопсій і порядок надходження біопсійного матеріалу на гістологічне дослідження Види біопсій і порядок надходження біопсійного матеріалу на гістологічне дослідження

Джерело: Види біопсій і порядок надходження біопсійного матеріалу на гістологічне дослідження

Також ви можете прочитати