Методи дослідження в гістології. Приготування гістологічного препарату, Гістологія, Медична література, MedicWorlds.

24.08.2015

Методи дослідження в гістології. Приготування гістологічного препарату

Основним методом дослідження в гістології є микроскопирование – вивчення гістологічних препаратів під мікроскопом. Останнім часом мікроскопія поєднується з іншими методами – гистохимией і гисторадиографией. Для мікроскопії використовують різні конструкції мікроскопів, що дозволяють вивчати різні параметри гістологічних препаратів.

Виділяються наступні види мікроскопії:

1) світлова мікроскопія (найбільш поширений вид мікроскопії, при цьому роздільна здатність мікроскопа складає 0,2 мкм);

2) ультрафіолетова мікроскопія (роздільна здатність мікроскопа складає 0,1 мкм);

3) люмінесцентна мікроскопія (застосовується для визначення в досліджуваному гістологічному препараті певних хімічних структур);

4) фазово-контрастна мікроскопія (застосовується для виявлення та вивчення певних структур в нефарбованих гістологічних препаратах);

5) поляризаційна мікроскопія (використовується в основному для вивчення волокнистих структур);

6) мікроскопія в темному полі застосовується для вивчення живих об’єктів;

7) мікроскопія в падаючому світлі (призначена для вивчення товстих об’єктів);

8) електронна мікроскопія (найбільш сучасний вид мікроскопії, має роздільну здатність 0,1 – 0,7 нм). Є два різновиди електронної мікроскопії – просвітчаста (трансмісійна) та скануюча (або розчинна) мікроскопія, яка дає відображення поверхневих ультраструктур.

Гістологічні та цитохімічні методи застосовуються для визначення складу хімічних речовин і їх кількості в певних структурах. Принцип методу полягає в хімічній реакції між реактивом і субстратом, що містяться в досліджуваній речовині. При цьому утворюються побічні продукти реакції можна виявити за допомогою світлової або люминисцентной мікроскопії.

Метод гистоавторадиографии дозволяє виявити склад хімічних речовин в досліджуваних структурах та інтенсивність обміну по включенню радіоактивних ізотопів. Даний метод найчастіше використовується при експериментах на тваринах.

Метод интерферонометрии дозволяє визначати суху масу речовини в живих чи фіксованих об’єктах.

Метод культури клітин – це вирощування клітин в пробірках або в спеціальних капсулах в організмі і подальше вивчення живих клітин під мікроскопом.

Метод вітального фарбування – введення тваринам в кров або в черевну порожнину барвника (трепанового синього), який при житті тварини захоплюється певними клітинами – макрофагами, а після забою тварини і приготування препарату визначаються і підраховуються клітини, що містять барвник.

Імуноморфологічні методи дозволяють за допомогою попередньо проведених імунних реакцій (на основі взаємодії антиген – антитіло) визначати субпопуляцию лімфоцитів, ступінь чужорідності клітин, проводити гістологічне типування тканин і органів, тобто визначати їх гистосовместимость для подальшої трасплантації.

Метод диференціального центрифугування – вивчення окремих органел або навіть їх фрагментів, виділених з клітки. Для цього шматочок досліджуваного органу розтирають, заливають фізіологічним розчином, а потім розганяють в центрифузі при різних обертах (від 2 до 150 тис. в 1 хв). В результаті центрифугування отримують цікавлять фракції, які потім вивчають різними методами.

Методи морфометрії – кількісні методи. Вони дозволяють визначати розміри та обсяги ядра – кариометрия, клітин – цитометрія, органел – електронна морфометрія, а також визначати кількість клітин різних популяцій і субпопуляцій. Дані методи широко використовуються в наукових дослідженнях.

Різні експериментальні методи – харчова і водне навантаження, фізичні методи (УВЧ, СВЧ, лазери, магніти). Вони застосовуються для вивчення реакції вакансій структур на той чи інший вплив і поєднуються з методами морфометрії, цито– і гистохимии. Дані методи також застосовуються в наукових дослідженнях.

Таким чином, основним і найбільш поширеним методом вивчення гістології є мікроскопія. Приготування гістологічного препарату включає в себе наступні етапи.

1. Взяття матеріалу – шматочки тканини або органу. При заборі матеріалу необхідно виконувати наступні правила:

1) забір матеріалу повинен проводитися якомога раніше після смерті або забою тварини, при можливості від живого об’єкта, щоб якомога краще зберегти структуру досліджуваних клітин;

2) забір матеріалу повинен проводитися гострим інструментом, щоб не травмувати тканини;

3) товщина шматка не повинна перевищувати 5 мм, щоб фіксуючий розчин зміг проникнути на всю глибину тканини;

4) обов’язково необхідно провести маркування шматочка, при цьому вказуються найменування органу, номер тваринного або прізвище людини, дата забору.

Короткий опис статті: препарати з гістології

Джерело: Методи дослідження в гістології. Приготування гістологічного препарату — Гістологія — Медична література — MedicWorlds.uk

Також ви можете прочитати