Методи дослідження в гістології. Підготовка препаратів для мікроскопії.

28.08.2015

Методи дослідження в гістології. Підготовка препаратів для мікроскопії.

Методи дослідження в гістології включають приготування гістологічних препаратів та їх вивчення з допомогою світлових або електронних мікроскопів. Гістологічні препарати представляють собою мазки відбитки органів, плівкові препарати, тонкі зрізи шматочків органів, пофарбовані тим чи іншим барвником (досліджуються також нативні — забарвлені зрізи), поміщені на предметне скло, укладені в бальзам і покриті тонким покривним склом.

Для виготовлення гістологічного препарату необхідно після взяття матеріалу зробити його фіксацію в тому чи іншому фіксаторі (формаліні, спирті, а для електронної мікроскопії — в глутаровом альдегиде і четырехокиси осмію). Робиться це для запобігання процесів аутолізу і збереження структури органу, близькою до прижиттєвої. Далі йдуть етапи зневоднення шматочка органу в спиртах зростаючої концентрації і в ксилолі з метою ущільнення тканин, що необхідно для виготовлення тонких зрізів. Для додання шматочку органу ще більшої щільності і гомогенності, що забезпечує високоякісну різання, проводять його заливку в органічну середу — парафін, целлоидин (для світлової мікроскопії) і органічні смоли (эпон, аралдит, дуркупан) — для електронно-мікроскопічного дослідження.

Існують також фізичні способи фіксації матеріалу. найбільш поширеним з яких є швидке заморожування шматочка органу з допомогою рідко.го азоту та інших коштів. Для різання замороженого матеріалу використовують спеціальні прилади — кріостати, або заморожують микротомы.

Товщина зрізів, призначених для світлової мікроскопії. не повинна перевищувати 4-5 мкм, для електронної 50-60 нм (такі ультратонкі зрізи виготовляють на спеціальному приладі ультратоме, використовуючи скляні або алмазні ножі і автоматичний режим різання).

Методи дослідження в гістології. Підготовка препаратів для мікроскопії.

Після отримання зрізів їх поміщають на предметні скла, далі йдуть етапи визволення зрізів від заливальної середовища (при світловій мікроскопії) і забарвлення для додання зрізах контрастності. Серед гістологічних барвників найбільш часто вживається поєднання гематоксиліну, маркірує ядро (кислотні молекули), та еозину, вибірково фарбувального білкові молекули (цитоплазматичний барвник).

По закінченні фарбування зрізи укладають у консервуючі середовища (канадський, кедровий бальзами) і накриваються покривним склом.

Основним методом гістологічного дослідження клітин, тканин і органів є світлова мікроскопія. У світловому мікроскопі для освітлення об’єкта використовуються промені видимого спектру. Сучасні світлові мікроскопи дозволяють отримувати дозвіл близько 0,2 мкм (роздільна здатність мікроскопа — це те найменша відстань, при якому дві поруч розташовані точки видно як окремі). Різновиди світлової мікроскопії — фазово-контрастна, інтерференційна, поляризаційна, темнопольная та ін

Фазово-контрастна мікроскопія — метод вивчення клітин в світловому мікроскопі, забезпеченому фазово-контрастним пристроєм. Завдяки зсуву фаз світлових хвиль в мікроскопі такої конструкції підвищується контрастність структур досліджуваного об’єкта, що дозволяє вивчати живі клітини.

Інтерференційна мікроскопія. У интерференционном мікроскопі падаючі на об’єкт світлові пучки роздвоюються — один пучок проходить через об’єкт, інший — йде повз. При подальшому возз’єднання пучків виникає интерференционное зображення об’єкта. По зсуву фаз одного пучка щодо іншого, можна судити про концентрацій різних речовин в досліджуваному об’єкті.

Поляризаційна мікроскопія. В мікроскопах цього типу світловий пучок розкладається на два промені, поляризовані у взаємно перпендикулярних площинах. Проходячи через структури тканини зі строгою орієнтацією молекул, промені запізнюються один щодо одного внаслідок неоднакового їх заломлення. Виникаючий при цьому зсув фаз є показником подвійного променезаломлення клітинних структур (таким способом були досліджені, наприклад, міофібрили).

Зміст теми «Методи гістології. Цитологія.»:

Короткий опис статті: препарати з гістології Методи дослідження в гістології. Підготовка препаратів для мікроскопії. методи дослідження в гістології, підготовка препаратів для мікроскопії

Джерело: Методи дослідження в гістології. Підготовка препаратів для мікроскопії.

Також ви можете прочитати